Cum functioneaza testele reale de CovID-19

15
aprilie
2020

Tot ce inseamna test, medicament sau dispozitiv medical trebui e aprobat de catre autoritatea nationala pentru reglementarea medicamentelor si dispozitivelor medicale. In SUA, ea se numeste FDA, in Europa se numeste EMA.

Există două tipuri de teste rapide. Unul este cel serologic (se prelevă o picătură de sânge din deget, prin înţepare) şi oferă rezultatele în 20-30 de minute, detectand anticorpii produsi de organ ismul care a venit in contact cu virionii. Acest test rapid CovID-19 la domiciliu determină prezenţa anticorpilor specifici împotriva noului subtip de coronavirus (SARS-CoV-2), respectiv IgM şi IgG.

Programeaza un Test rapid ELISA pentru COVID19 la domiciliu din:

Trebuie precizat însă că acest tip de test rapid nu oferă un diagnostic precoce, pentru că se pozitivează la 3-5 zile de la debutul clinic al bolii. Cu alte cuvinte, în cazul unei persoane asimptomatice, care se află la mai mult de 3-5 zile de la debutul bolii, testul poate fi pozitiv. Practic, testul te ajută când iese pozitiv, pentru că are o specificitate înaltă. În cazul în care testul iese negativ la o persoană simptomatică, se recomandă repetarea testului la 5 zile, pentru a pune în evidenţă o seroconversie, adică trecere de la absenţa anticorpilor la prezenţa anticorpilor specifici noului tip de coronavirus.

Un test similar se poate face si din exsudat nazo-faringian, oferind rezultatele dupa 20-30min şi are scopul de a identifica antigenul viral, adica bucati din vurusul real, fiind similar testelor rapide pentru gripă A si B. Aceste teste rapide sunt mai eficiente decât cele de tip serologic, deoarece sunt utile atât pentru diagnosticul rapid, cât şi pentru diagnosticul precoce al infecţiei cu noul coronavirus.

Însă trebuie subliniat că ambele teste rapide menţionate sunt teste orientative, care nu sunt încă validate de FDA, autoritatea americană pentru aprobarea medicamentelor. Noi dispunem acum în România de teste rapide care identifică anticorpii, nu antigenii.

Testul RT-PCR (Real Time Polymerase Chain Reaction) e singurul validat de Organizaţia Mondială a Sănătăţii

Testele de tip RT-PCR identifică amprenta genetică a virusului (genomul viral), adică ARN-ul. Sunt mai multe platforme de PCR, proba se poate preleva din secreţii respiratorii, exsudat nazo-farigian sau aspirat bronşic ori lavaj bronhoalveolar, la pacientul intubat orotraheal, la care nu avem diagnostic şi la care testul din exsudat a ieşit negativ. Timpul de aşteptare variază, în funcţie de platforma folosită, de metodologie, de la 45 de minute până la 6 ore. Dacă vorbim de tehnici automatizate, rezultatele se obţin în 45 de minute, iar dacă e nevoie de pregătire anterioară, trebuie respectate anumite etape care trebuie făcute manual, rezultatele se obţin în aproximativ 6 ore.

Deocamdata ne bazăm acum pe aceste teste PCR, care sunt standardul de aur în diagnosticarea COVID-19, singurele validate de Organizaţia Mondială a Sănătăţii. Practic, pe baza lor, noi putem confirma cazurile şi putem spune când un pacient se negativează şi are criterii de externare.

Peste 90 de companii și laboratoare au demarat procesul de aprobare de urgență a testelor diagnostice SARS-CoV-2. Tehnologia de biologie moleculara care sta la baza testelor ne da informatii despre modul in care poate functiona un vaccin impotriva coronavirusului SARS-Cov2.

FDA a aprobat testele Panther Fusion SARS-COV-2 Assay (produs de Hologic) și COVID-19 RT-PCR test (produs de Laboratory Corporation of America), iar pe 13 martie 2020, printr-o procedură specială (EUA – Emergency Use Authorization), primul test comercial pentru utilizarea de urgență pentru diagnosticarea infecției cu SARS-CoV-2. Procedura este excepțională și nu înseamnă o aprobare clasică de punere pe piață, dar vine ca un răspuns al autorităților de reglementare și a industriei față de urgența de sănătate publică reprezentată de pandemia COVID-19. Testul poate fi folosit și în statele care acceptă marca CE și în care sunt confirmate cazuri de infecție, deci și în România.

Acordul FDA a venit la numai 24 de ore de când producătorul, compania Roche, a depus solicitarea. De la începutul crizei, FDA a lucrat cu un număr de peste 60 de companii sau centre academice pentru dezvoltarea testelor diagnostice pentru noul coronavirus.

Testul se numește cobas® SARS-CoV-2 Test, iar kit-ul poate fi folosit pe sistemele de tip cobas 6800 și 8800, care există deja în laboratoare publice sau private, inclusiv din România. Pentru analiză, se folosesc probe din exsudatele nazale sau faringiene, iar rezultatul poate fi disponibil în doar trei ore jumătate. Pot fi analizate simultan 96 de probe, iar în 24 de ore pot fi analizate între 1.440 sau 4.128 de probe, în funcție de dispozitivul de testare utilizat.

MOmentan sunt aprobate cateva variante de teste rapide. Testele rapide sunt si ele de mai multe feluri, unele care se pot face si de pacient la domiciliu cu sange din deget, si unele care se citesc pe aparate. Casetele si principiul de functionare este identic la toate testele rapide, aparatele respective ridicol de scumpe sunt doar niste cititoare de bare, citesc barele pe care le putem vedea si noi cu ochiul liber. In plus, aparatele asigura izolarea probei si servicii anexe, gen centrifugarea probei pentru extragerea serului.

Testele moleculare (care nu sunt rapide, ci dureaza cateva ore) sunt teste care evalueaza prezenta acizilor nucleici si cuantifica elementele cautate din proba. Acestea se pot face doar in spital si sunt destul de scumpe, pentru ca sunt si cele mai exacte, nu ai cum sa greseti, ca nu migreaza pe lama alta molecula decat cea selectata.

Acestea functioneaza prin amplificarea ARN viral si migrarea lui in camd electric.

Ce presupune diagnosticarea prin RT-PCR?

Identificarea genotipului SARS-CoV-2 s-a realizat în timp record, la doar o lună de la primele cazuri de pneumonie din Wuhan, China. Primele teste diagnostice, de identificare a virusului în probe biologice, au fost dezvoltate o săptămână mai târziu. Testul diagnostic al SARS-CoV-2 este un test de tip RT-PCR (reacția de polimerizare în lanț), la care se adaugă revers transcriptaza și identificarea în timp real (cu ajutorul unor markeri fluorescenți). Astfel, din proba biologică obținută de la pacient se obține o probă purificată, care conține tot materialul genetic al virusului.

Deoarece SARS-CoV-2 este un virus de tip ARN (informația genetică e codificată sub formă de acid ribonucleic) este necesară adăugarea enzimei revers transcriptază, care transformă fragmentele de ARN în secvențele corespunzătoare de ADN. Ulterior, prin procedeul RT-PCR, secvențele ADN sunt multiplicate, astfel încât ating o concentrație suficientă pentru a fi identificate. Ulterior, se adaugă un marker fluorescent, care recunoaște în mod exclusiv secvențe genetice specifice virusului SARS-CoV-2. Astfel, proba este considerată pozitivă dacă apare fluorescența (adică prezența virusului e confirmată de existența secvențelor genetice unice).

În ce regiuni ale organismului se regăsește virusul?

Fiind un virus cu transmitere aeriană, cel mai frecvent poate fi identificat la pacienți în secrețiile respiratorii: exsudat nazal sau faringian, spută, lavaj bronhoalveolar sau probe de biopsie endoscopice. Toate acestea sunt metode de colectare a secrețiilor provenite din plămâni și eliberate din organism și au fost colectate mai multe probe, din diferite localizări, de la fiecare pacient. Detecția SARS-CoV-2 a variat între 32% (exsudatul faringian) și 93% (lavajul bronhoalveolar). În plus, coronavirusul viu (care poate fi transmis) a fost detectat și în proba de fecale (29% dintre probe), foarte rar în sângele pacienților (1% dintre probe), iar probele de urină au fost toate negative.

Virusul SARS-CoV-2 a putut fi identificat în majoritatea probelor biologice prelevate de la pacienți. Cea mai mare concentrație virală se regăsește la nivelul cavității nazale (cel mai mic număr de cicluri PCR de multiplicare necesare pentru a atinge o concentrație optimă detectării virale).

Despre
Ultimele Postari

Vino cu mine

Daniel Ganea

Medic la ConsultatiiLaDomiciliu.ro

"Prin site-ul ConsultatiiLaDomiciliu.ro vreau să fiu mai aproape de pacienții mei."
Dr. Daniel Ganea este "Doctorul tău", Medic Specialist Medic de familie, medic rezident cardiologie, cu Competență în Ecografie și a scris numeroase articole pentru pacienți.
A început cariera ca medic specialist în 2009 în Urgență, a lucrat și pe Ambulanță, aflând ce-și doresc de la medic pacienții care solicită online consultații medicale cu medic specialist la domiciliu. Astfel a aparut ConsultatiiLaDomiciliu.ro

Programează consultație
"Cine te poate sfatui mai bine decat medicul, specialist in domeniul lui?"

Vino cu mine

Ultimele postari ale lui Daniel Ganea (vezi toate)