Test GIARDIA – antigenul din materiile fecale

Test GIARDIA – antigenul din materiile fecale

Timp de citire estimat: 10 minut(e)

STICK GIARDIA/SIMPLE GIARDIA
Test imunocromatografic într-o singură etapă pentru detectarea antigenului giardia în materiile fecale

UTILIZARE

Metoda cromatografică a testului Giardia este o procedură pentru detectarea calitativă in vitro a antigenului Giardia în materiile fecale.

Giardia intestinalis, denumit şi Giardia lamblia. este un protozoar gastrointestinal care infectează diverse specii (mamifere, păsări, etc.). Provoacă un tablou clinic care variază de la purtător fără simptome, până la cazuri de boală diareică acută sau cronică, în special la copii. Paraziţii sunt găsiţi în întreaga lume, în special în zonele cu condiţii sanitare deficitare.

Giardia lamblia infectează prin ingestia chisturilor sale, care pot rămâne viabile chiar şi în apă cu clor. Când chisturile ajung în duoden, fiecare dintre ele elimină până la 4 trofozoiţi flagelaţi (forma invazivă) care colonizează celulele din duoden şi jejunul proximal. Simptomele apar la 1-3 săptămâni după contaminare, urmând o perioadă de incubaţie de aproximativ 8 zile. Cea mai frecventă prezentare este caracterizată prin diaree, pierdere în greutate, durere abdominală de tip colică, creştere şi dezvoltare lentă. Debutul simptomelor poate fi brusc sau treptat; boala poate fi auto-limitată sau poate produce diaree severă cu absorbţia intestinală necorespunzătoare. La om, modificările funcţionale digestive sunt frecvente la copii. Există simptome persistente, cum ar fi absorbţia slabă de zahăr (în special dizaharide, cum ar fi zaharoza şi lactoza), grăsimi şi vitamine liposolubile. Intoleranţa la lactoză este comună în urma infecţiei şi pot apărea recidive acute sau re-infectarea. în cazuri rare. trofozoiţii invadează peretele intestinal, provocând diaree inflamatorie şi febră. Producerea de substanţe toxice de către aceştia nu s-a documentat.

 

Testul se bazează pe captarea imunologică a microparticulelor colorate, pe măsură ce acestea trec printr-o membrană pe care a fost imobilizat anticorpul monoclonal.

 

PRINCIPIUL

festele Simple Giardia şi Stick Giardia folosesc anticorpi specifici monoclonali Giardia lamblia care detectează toate formele ciclului de viaţă al paraziţilor.

Testul se bazează pe utilizarea de microsfere roşii legate covalent la un anticorp monoclonal anti-Giardia lamblia, plus microsfere albastre ca martor de testare.

Parazitul prezent în materiile fecale reacţionează cu particulele de latex care sunt acoperite cu anticorpii monoclonali specifici împotriva antigenului. Acest complex format din particule de latex/anticorpi/parazit migrează printr-un proces cromatografic spre zona de reacţie. în această zonă există anticorpi anti-Giardia care reacţionează cu complexul format din particule de latex/anticorpi/parazit. Această reacţie conduce la apariţia unei linii roşii. Aceste linii sunt folosite pentru a interpreta rezultatul, după incubare la temperatura camerei timp de cinci minute.

Conţinutul setului

1 .Dispozitive de reacţie (SIMPLE sau STICK)

Numărul de dispozitive de reacţie din set este indicat pe etichetă exterioară a setului după simbolul V

2. Flacoane conţinând soluţia tampon de diluare

Volumul de soluţie tampon de diluare furnizat este proporţional cu numărul de benzi incluse şi este indicat pe eticheta flaconului care îl conţine.

Notă: In formatul SIMPLE, numărul de flacoane furnizate trebuie să fie acelaşi cu numărul de casete. (Exemplu: un set de 20 de unităţi trebuie să conţină 20 casete + 20 flacoane)

în formatul STICK, volumul total al soluţiei tampon de diluare pentru toate benzile este furnizat într-un singur flacon.

MATERIALE NEINCLUSE ÎN SET

  • Eprubete
  • Pipete – care pot fi gradate
  • Capete de pipete

MĂSURI DE PRECAUŢIE

  1. Probele pacienţilor (materii fecale) pot conţine agenţi infecţioşi şi trebuie să fie manipulate şi eliminate ca materiale biologice potenţial periculoase.
  2. Soluţia tampon conţine azidă de sodiu ca agent antimicrobian. Evitaţi contactul direct cu pielea şi mucoasele. Eliminaţi în mod corespunzător. Nu utilizaţi soluţia tampon în cazul în care există indicii de contaminare sau precipitare.
  3. Nu depozitaţi şi nu preparaţi alimente, nu mâncaţi, nu beţi şi nu fumaţi în zona în care sunt manipulaţi reactivii şi probele.
  4. Purtaţi mănuşi de unică folosinţă la manipularea probelor. Spălaţi-vă bine mâinile după ce aţi terminat lucrul.
  5. Nu schimbaţi componentele din seturi cu numere de loturi diferite.
  6. Utilizaţi toţi reactivii numai in vitro.
  7. înainte de utilizare, lăsaţi toate componentele setului şi probele să ajungă la temperatura camerei, deoarece reactivii şi/sau probele reci pot reduce funcţionalitatea testului. De obicei sunt suficiente aproximativ 20-30 de minute pentru a ajunge la temperatura camerei.
  8. Nu utilizaţi componentele setului după data de expirare.
  9. în cazul în care ambalajul este rupt, produsul poate fi utilizat în continuare, atât timp cât niciunul dintre componente nu a fost deteriorat.
  10. Este important să se adauge cantitatea corectă de probă (4-5 picături de suspensie). Dacă se utilizează mai puţin decât este indicat, cromatografia nu poate avea loc, deoarece proba nu poate ajunge la zona de reacţie; dacă se utilizează o cantitate prea mare. pot apărea linii maro în loc de cele roşii şi albastre.

1 1. Produsul utilizat trebuie eliminat conform legislaţiei în vigoare.

  1. Nu utilizaţi testul dacă apare o linie colorată în zona de rezultate înainte de a începe să-l utilizaţi.
  2. Este important să se ia cantitatea corespunzătoare de materii fecale: 30-50 mg de materii fecale solide sau aprox. 100 ul de materii fecale lichide. O cantitate excesivă de probă împiedică o cromatografie corectă.
  3. în cazul produsului STICK ambalat într-o eprubetă, este important să se închidă eprubeta din nou imediat după scoaterea benzii reactive; în caz contrar, umiditatea ridicată a camerei poate deteriora restul benzilor din interiorul tubului.

DEPOZITARE

Setul poate fi depozitat la temperaturi între 2°C şi 30°C (poate fi păstrat la frigider). Data de expirare este stantată pe ambalaj.

PROBE

Probele de materii fecale trebuie să fie colectate într-un recipient steril corespunzător, cât mai curând posibil după debutul simptomelor. Proba trebuie să fie reprezentativă, dacă este posibil.

Probele pot fi stocate în frigider (la aproximativ 4°C) timp de 1-2 zile înainte de a fi analizate. Pentru a conserva probe pentru o perioadă mai lungă, păstraţi-le într-un congelator la -20°C, tară manipulare suplimentară. în acest caz, proba trebuie să fie complet dezgheţ adusă la temperatura camerei şi omogenizată înainte de analiză.

PROCEDURA

PROCEDURA SIMPLE GIARDIA

  1. Important: Luaţi probe din cel puţin trei locaţii diferite ale probei, cu scopul de a obţine o probă cât mai reprezentativă posibil.
  2. Deşurubaţi capacul flaconului cu grijă, astfel încât să nu vărsaţi soluţia tampon de extracţie. Colectaţi o cantitate suficientă de materii fecale (30-50 mg) cu capătul aplicatorului. Dacă materiile fecale sunt lichide, colectaţi 100 microlitri cu ajutorul unei pipete şi transferaţi în flacon.
  3. Introduceţi aplicatorul cu specimenul în flacon.
  4. înşurubaţi bine capacul şi agitaţi puternic pentru a asigura un amestec omogen.
  5. Scoateţi aparatul de reacţie din punga de aluminiu.
  6. Aruncaţi punga mică de agent deshidratant; nu este folosit în timpul testului, deoarece unicul său scop este de a proteja testul împotriva umezelii.
  7. Rupeţi capătul superior al flaconului.
  8. Adăugaţi 4 sau 5 picături în zona probei din aparatul de reacţie (fereastra rotundă marcată cu o săgeată). Nu adăugaţi particule solide împreună cu lichidul.
  9. Aşteptaţi 5 minute şi apoi citiţi şi interpretaţi rezultatul.

PROCEDURA STICK GIARDIA

  1. Important: Luaţi probe din cel puţin trei locaţii diferite ale probei, cu scopul de a obţine o probă cât mai reprezentativă posibil.

Luaţi o eprubetă pentru fiecare probă. Adăugaţi aproximativ 1-1,5 ml de soluţie tampon.

  1. Apoi, luaţi o cantitate mică de materii fecale (30-50 mg) şi resuspendaţi-o în soluţia tampon. Dacă se utilizează un beţişor cu vată. scufundaţi-1 în soluţia tampon şi apăsaţi capătul cu vată pe marginile eprubetei. rotind beţişorul. în cazul în care materiile fecale sunt lichide, colectaţi 100 microlitri cu ajutorul unei pipete şi transferaţi la flacon.
  2. Agitaţi puternic pentru a suspenda proba în diluant (sau centrifugaţi timp de 15 secunde).
  3. Aşteptaţi cel puţin 3 minute, până când particulele solide s-au depus pe fund sau centrifugaţi timp de 1 minut la 700 x g. Apoi, cu ajutorul unei pipete, transferaţi 150 microlitri de supernatant într-un altă eprubetă.
  4. Scoateţi aparatul de reacţie din punga de aluminiu. Aruncaţi punga mică de agent deshidratant; nu este folosit în timpul testului, deoarece unicul său scop este de a proteja testul împotriva umezelii.
  5. Introduceţi banda reactivă în a doua eprubetă, cu săgeţile indicând spre partea de jos a eprubetei.

IMPORTANT: Lichidul nu trebuie să ajungă în zona cu săgeţi. Dacă este necesar, utilizaţi o eprubetă mai lungă sau reduceţi cantitatea de probă.

  1. Citiţi rezultatul în zona albă din centrul benzii după 5 minute.

Notă: Banda poate fl. de asemenea, introdusă în prima eprubetă sau flacon, atât timp cât acesta este suficient de lung pentru ca lichidul să nu ajungă în zona cu săgeţile. Cu toate acestea. în cazuri rare, absorbţia poate fi împiedicată din cauza unui eşantion foarte concentrat.

Alternativ, banda poate fi scufundată în prima eprubetă timp de 10 secunde (fără a trece de vârfurile săgeţilor) şi apoi lăsată să reacţioneze pe o suprafaţă orizontală.

 

CITIREA REZULTATELOR

Codul de interpretare pentru imaginile de pe bandă.


NEGATIV: Există doar o singură linie ALBASTRĂ în zona rezultatelor (în testul SIMPLE este aliniată cu litera „C” (Control), marcată pe cadrul dispozitivului). Această linie trebuie să apară întotdeauna.

G: Giardia Iamblia N: Negativ

POZITIV Giardia: o linie ALBASTRĂ şi o linie separată ROŞIE/ROZ apar în zona rezultatelor (în testul dispozitivului, aliniate cu litera „T” (Test), marcată pe cadrul dispozitivului). Intensitatea poate varia în funcţie de concentraţia de antigen prezentă.

INVALID. Testul nu este VALABIL în cazul în care nicio linie albastră nu apare deoarece procedura nu a fost urmată în mod corect, reactivii s-au deteriorat sau s-a adăugat o cantitate incorectă de probă. Repetaţi testul cu un nou dispozitiv de reacţie.

Orice linie care poate apărea după 5 minute datorită naturii probei nu are valoare de diagnostic.

Diagnosticul final nu trebuie să se bazeze numai pe rezultatul de la un test. Diagnosticul trebuie să fie stabilit prin corelarea rezultatelor testului cu alte date corespunzătoare şi cu simptomele clinice.

 

CONTROLUL DE CALITATE

Testul nu este valabil în cazul în care nu apare nicio linie albastră, deoarece testul nu s-a efectuat corect sau reactivii s-au deteriorat. Dacă se întâmplă acest lucru, repetaţi analiza urmând îndeaproape protocolul de lucru indicat în aceste instrucţiuni.

AVERTISMENT: Se recomandă inclusiv un control cu un rezultat stabilit pentru a vă asigura că datele obţinute sunt corecte.

LIMITELE PROCEDURII

  1. Testul trebuie să fie folosit numai pentru detectarea antigenului Giardia lamblia în materii fecale.
  2. Acesta este un test calitativ; nicio interpretare cantitativă a rezultatului nu trebuie făcută în ceea ce priveşte intensitatea liniei pozitive.
  3. Peste 200 de probe au fost evaluate pentru a asigura funcţionarea corectă a testului. Corelarea rezultatelor cu alte tehnici (EL1SA) a fost excelentă. Cu toate acestea, nu pot fi excluse interferenţe în executarea testului.
  4. Dacă există o cantitate prea mare de probă, pot apărea linii maro în loc de cele roşii şi albastre sau se poate să nu existe deloc linii de testare şi de control, deoarece cromatografia nu este realizată în mod corect. Liniile maro nu au nicio valoare de diagnostic. Dacă se întâmplă acest lucru, repetaţi testul cu o cantitate mai mică de materii fecale sau diluaţi extractul preparat anterior.
  5. Nicio reacţie încrucişată cu alte substanţe nu a fost observată în timpul evaluării testului. Un rezultat negativ nu exclude în totalitate posibilitatea de infectare cu Giardia lamblia. Importanţa rezultatelor trebuie să fie evaluată în raport cu simptomele clinice ale pacientului.
  6. Analiza unor probe poate produce linii de culoare imprecise. în majoritatea cazurilor cauzate de probe negative. Testul se repetă în cazul în care apar linii de culoare nedeterminată. In cazul în care acelaşi rezultat este obţinut din nou, analiza trebuie realizată cu o altă metodă analitică.

 

SENSIBILITATEA ŞI SPECIFICITATEA DE DIAGNOSTICARE

TESTUL 1

Un produs Elisa marcat CE a fost luat ca produs de referinţă. Simple Giardia/Stick Giardia a fost evaluat comparativ cu Elisa pentru detectarea antigenului Giardia. Rezultatele au fost următoarele:

    Ridascreen GiardiaElisa
    +
Operon Stick 4″ 26 0
Giardia 1 53
Concordanţa procentuală: 100% [(26 + 53)/80] = 98.8%. Concordanţa de sensibilitate estimată: 100% [26/(26 + 1)] = 96,3%. Concordanţa de specificitate estimată: 100% [53/(0 + 53)] => 99.9%.

 

 

TESTUL 2

Detectarea paraziţilor prin microscop a fost luată ca tehnică de referinţă. S1MPLE/STICK GIARDIA a fost evaluat comparativ cu microscopia pentru detectarea antigenului Giardia. Rezultatele au fost următoarele:

Giardia:

    Microscopie
    +
Operon Stick + 15 1
Giardia 0 53

Concordanţa procentuală: 100% [(15 + 53)/69] => 98,5% Concordanţa de sensibilitate estimată: 100% [ 15/(15 + 0)] = > 99.9% Concordanţa de specificitate estimată: 100% [53/( 1 + 53)] => 98%.

 

 

REPETABILITATEA ACURATEŢEA ÎNTRE TESTE

Au fost testate cinci replici din fiecare concentraţie a curbei de sensibilitate cu un singur lot, obţinând aceleaşi rezultate.

REPRODUCTIBILITATEA ACURATEŢEA ÎNTRE ZILE

Folosind 1 lot de produs, s-au efectuat 4 replici ale curbei de sensibilitate în 10 de zile consecutive. S-a constatat numai o diferenţă, mai puţin de 1: 2 diluţie, care este acceptabilă şi tolerabilă pentru tehnica imunocromatografiei.

ACURATEŢEA ÎNTRE LABORATOARE

Trei tehnicieni din laboratoare diferite au analizat aceleaşi probe, menţinând o precizie şi concordanţă ridicate. S-a constatat numai o diferenţă, mai puţin de 1: 2 diluţie, care este acceptabilă şi tolerabilă pentru tehnica imunocromatografiei.

ACURATEŢEA ÎNTRE LOTURI

O curbă de sensibilitate a fost realizată în duplicat cu 3 loturi de produse. Analizele au fost preformate de aceeaşi persoană în aceeaşi zi. S-a constatat numai o diferenţă, mai puţin de 1: 2 diluţie, care este acceptabilă şi tolerabilă pentru tehnica imunocromatografiei.

EFECTUL HOOK

Niciun standard concentraţie cunoscută nu a fost disponibil. Cu toate acestea, analiza curbei de sensibilitate bazată pe concentraţia maximă posibilă a standardului intern nu a demonstrat existenţa vreunui efect Hook.

SUBSTANŢE INTERFERENŢE

Substanţele indicate în tabel, la concentraţia specificată, nu au interferat cu rezultatul. Pentru realizarea studiului a fost folosit un singur lot.

Metronidazol 1,2 mg/ml
Racecadotril 0.72 mg/ml
Loperamidă 24 ug/ml
Atropină Braun 1,68 ug/ml
Cimet idină 1,92 mg/ml
Omeprazol 0,144 mg/ml
Neomicină 6.62 mg/ml
Ampicilină 7.2 mg/ml
Ibuprofen 5,76 mg/ml
Acid acetilsalici 1 ic 4,8 mg/ml
Zaharoză 8 mg/ml
Sânge 10% (v/v)

 

MICROORGANISME INTERFERENŢE

Microorganismele indicate mai jos nu au provocat nicio interferenţă cu rezultatul. Bacterie/parazit/virus antigenului Giardia Iamblia şi Cryptosporidium folosind combinaţia ColorPAC de test imunocromatografic rapid, calitativ, fază solidă”. Jurnalul de microbiologie clinică (2000). Voi 38. nr.3, p. 1267-1268.

  • Sharp S.E. şi colab. „Evaluarea panoului de triere a microparaziţilor pentru detectarea Giardia lamblia, Entamoeba histolytica/Entamoeba dispar şi Cryptosporidium parvum în materiile fecale ale pacienţilor”. Jurnalul de microbiologie clinică (2001). Voi 39, nr. 1. p. 332-334.
  • Katanik M.T. şi colab. „Evaluarea testului rapid ColorPac Giardia/Cryptosporidium şi a testului în microplăci Prospect Giardia/Cryptosporidium pentru detectarea Giardia şi Cryptosporidium în probele de fecale”. Jurnalul de microbiologie clinică (2001). Voi 39, nr.12, p. 4523-4525.

 

Operon. SA – Camino del Plano, 19 – E-50410 Cuarte de Huerva – (Zaragoza) – SPANIA

Vino cu mine

Daniel Ganea

"Prin site-ul ConsultatiiLaDomiciliu.ro vreau să fiu mai aproape de pacienții mei."  
Dr. Daniel Ganea este "Doctorul tău", Medic Specialist Medic de familie, medic rezident cardiologie, cu Competență în Ecografie și a scris numeroase articole pentru pacienți.
A început cariera ca medic specialist în 2009 în Urgență, a lucrat și pe Ambulanță, aflând ce-și doresc de la medic pacienții care solicită online consultații medicale cu medic specialist la domiciliu. Astfel a aparut ConsultatiiLaDomiciliu.ro

Programează consultație

"Cine te poate sfatui mai bine decat medicul, specialist in domeniul lui?"

Vino cu mine

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată. Câmpurile obligatorii sunt marcate cu *